Servicios científicos

Citometría de flujo

W

Responsable del servicio

Berta Raposo

W

Coordinador científico

María Luisa Toribio

W

Contacto

91 196 44 99

citometria (at) cbm.csic.es

W

Sistema de reservas

W

Reactivos

W

Tarifas

En el servicio de Citometría de flujo del CBM, nuestro personal proporciona apoyo científico-técnico en citometría de flujo, desarrolla y optimiza nuevas aplicaciones y realiza separaciones celulares.

La citometría de flujo es una herramienta analítica que permite discriminar partículas de diferente tamaño y color. Es una técnica analítica y/o preparativa basada en el análisis simultáneo de varios parámetros de naturaleza óptica, de forma rápida y sobre un gran número de partículas individualizadas. Este análisis se realiza sobre cada partícula a partir de la dispersión de la luz y de la emisión de fluorescencia de las partículas iluminadas por una fuente luminosa.

Los parámetros que pueden analizarse mediante citometría de flujo son: i) los relacionados con las características físicas de la partícula: tamaño y complejidad y ii) las diferentes fluorescencias asociadas a la partícula.

El análisis se realiza a tasas de miles de células/segundo, lo que permite obtener datos de gran fiabilidad estadística, así como identificar poblaciones representadas a baja frecuencia dentro de la población global.

Otra característica importante de la citometría de flujo es que el análisis se realiza en una suspensión de partículas, por lo que las partículas o células analizadas deben estar en suspensión y en forma de partícula única (célula).

Por último, es importante señalar que existe una restricción en cuanto al tamaño de las partículas analizadas, que debe estar comprendido entre 0,5 y 100um.

Vacío
Citometría convencional

 

FACSCalibur (Becton Dickinson)
Características ténicas:

 

 

Dotado de dos líneas láser: azul (488nm) y roja (633nm)
con 4 detectores de fluorescencia independientes:
3 detectores para el láser de 488nm (azul): 530/30, 585/42, 670LP.
1 detector para el láser de 633nm (rojo) laser:660/20.

Software: Cell Quest-Pro


FACSCanto A (Becton Dickinson)
Características ténicas:

 

 

Dotado de dos líneas láser: azul (488nm) y roja (633nm) con 6 detectores de fluorescencia independientes:
4 detectores para el láser de 488nm (azul): 530/30, 585/42, 695/40, 780/60
2 detectores para el láser de 633nm (rojo): 660/20, 780/60

 

 

Software: DiVA 8.0.1

FACSCanto II HTS (Becton Dickinson)
Características técnicas:

 

 

Equipado con un sistema High Throughput Sampler Option (HTS) para la adquisición de muestras directamente desde placa multipocillo.
3 líneas láser: azul (488nm), rojo (633nm) y violeta (405nm)
8 detectores de fluorescencia independientes:

4 detectores para el láser de 488nm (azul): 530/30, 585/42, 695/40, 780/60
2 detectores para el láser de 633nm (rojo): 660/20, 780/60
2 detectores para el láser de 405 nm (violeta): 450/50, 575/26

Software: DiVA 8.0.1

FACSCanto II High (solo tubos) (Becton Dickinson)
Características técnicas:

 

 

Equipado con un sistema High Throughput Sampler Option (HTS) para la adquisición de muestras directamente desde placa multipocillo.
3 líneas láser: azul (488nm), rojo (633nm) y violeta (405nm)
8 detectores de fluorescencia independientes:
4 detectores para el láser de 488nm (azul): 530/30, 585/42, 695/40, 780/60
2 detectores para el láser de 633nm (rojo): 660/20, 780/60
2 detectores para el láser de 405 nm (violeta): 450/50, 605/10

 

 

Software: DiVA 8.0.1

 

Citometría espectral
AURORA 4L (Cytek)
Configuración óptica: 4L (16V-14B-10YG-8R)
4 líneas láser y 48 detectores: 16 detectores para el láser violeta (405nm), 14 detectores para el azul (488nm), 10 detectores para el verde amarillo (561nm) y 8 detectores para el rojo (633nm).
Características técnicas: Este equipo utiliza tecnología de espectro completo proporcionando una gran flexibilidad a los usuarios, permitiéndoles el uso de una amplia gama de fluorocromos combinándolos mucho más fácilmente que con otras tecnologías. Además, mejora la resolución de las poblaciones especialmente en muestras con alta autofluorescencia y/o bajos niveles de expresión de marcadores.
AURORA 5L ESP (Cytek)
Configuración óptica: 5L (16UV-16V-14B-10YG-8R)
4 líneas láser y 64 detectores: 16 detectores para el láser ultravioleta (355nm),16 detectores para el láser violeta (405nm), 14 detectores para el azul (488nm), 10 detectores para el verde amarillo (561nm) y 8 detectores para el rojo (633nm).
Características técnicas: Este equipo utiliza tecnología de espectro completo proporcionando una gran flexibilidad a los usuarios, permitiéndoles el uso de una amplia gama de fluorocromos combinándolos mucho más fácilmente que con otras tecnologías. Además, mejora la resolución de las poblaciones especialmente en muestras con alta autofluorescencia y/o bajos niveles de expresión de marcadores.
Este equipo está dotado además con un módulo de alta sensibilidad en el detector de SSC que permite resolver partículas de menor tamaño que otros equipos logrando separarlas más fácilmente del ruido electrónico. (ESP, Enhanced Small Particle Detector)

 

Cell sorters

FACSAria Fusion (Becton Dickinson)
El BD FACSAria Fusion es un separador celular fácil de usar que permite la separación de un gran número de muestras de diferentes orígenes. Se instala en una cabina de bioseguridad de Clase II Tipo A2 equipada con un sistema integrado de contención de aerosoles que funciona de forma independiente. A continuación se detallan algunas características técnicas:

Equipada con cuatro láseres de excitación de 405, 488, 561 y 640 nm.

Dieciocho detectores (16 de fluorescencia + 2 de dispersión) de los cuales:

5 son para el láser de 405 nm (450/40, 525/50, 610/20, 660/20, 710/50, 780/60)

2 para el láser de 488 nm: 530/30, 695/20

4 para el láser de 561 nm: 610/20, 670/14, 710/50, 780/60

3 para el láser de 640 nm: 670/30, 730/45, 780/60. También está equipado con un sistema de control de temperatura y agitación de muestras.

 

Estaciones de análisis y software

El servicio pone a disposición de los usuarios tres estaciones de análisis (Hewlett-Packard) equipadas con los siguientes programas para analizar datos de citometría e imagenes:

– Estación 1: FlowJo v10 y 7.6.5, Spectroflo3.3.1 (configuración de 4 o 5 L)

– Estación 2: FlowJo v10, Spectroflo 3.3. 1 (configuración de 4 L)

– Estación 3: FlowJo v10, Spectroflo 3.3.1 (configuración de 5 L), Gen5 y DIVA 9.
Además, el servicio pone a disposición de los usuarios una licencia del software on line OMIQ (una moderna plataforma de análisis de citometría de flujo basada en el uso de algoritmos matemáticos automatizados a la vez que permiten análisis clásico de gating manual.

Otros equipos

Cytation (Agilent)
Características técnicas: Este equipo combina imágenes de fluorescencia y campo claro de alto contraste con detección multimodo convencional.

Este microscopio está equipado con un objetivo 4X, y 3 líneas de fluorescencia:
– DAPI (EX 377/50 nm, EM 447/60 nm); LED 365 nm.
– GFP (EX 469/35 nm, EM 525/39 nm); LED 465 nm
– RFP (EX 531/40 nm, EM 593/40 nm); LED 523 nm

El Software de adquisición Gen5 simplifica la captura de imágenes y la lectura de placas.

eFlux Analyzer XF96 (Agilent)
Características técnicas:

El Analizador de Flujo Extracelular XF96 (Agilent-Seahorse) permite la caracterización del metabolismo energético de células en cultivo de forma no invasiva.

El instrumento analiza el consumo de oxígeno (OCR) y la acidificación extracelular (ECAR, una medida indirecta de la producción de lactato) en placas de 96 pocillos.

Nuestro servicio proporciona acceso al equipo, así como asistencia básica tanto en el diseño de experimentos como en el análisis de datos.

NanoSight NS300 (Malvern Panalytical)
Características técnicas: El NanoSight NS300 utiliza la tecnología de análisis de seguimiento de nanopartículas (NTA), que aprovecha las propiedades de la dispersión de la luz y el movimiento browniano para obtener mediciones de la concentración y la distribución de tamaños de partículas en suspensión líquida.
– Rango de tamaños: 10 – 1000 nm
– Rango de concentración: 106 – 109 partículas/ml
– Rango de control de temperatura: 5 °C por debajo de la temperatura ambiente hasta 50 °C
– Volumen mínimo de muestra: 250 µl
– Cámara: SCMOS
– Enfoque: Enfoque motorizado controlado por ordenador

Aplicaciones:
– Análisis molecular y de distribución de tamaño de partículas.

 

Personal

Berta Raposo Ponce

Lab.: 111 Ext.: 4499
braposo(at)cbm.csic.es

Raquel Nieto Pintado

Lab.: 111 Ext.: 4698/4705
rnieto(at)cbm.csic.es

Silvia Andrade Calvo

Lab.: 111 Ext.: 4698/4705
sandrade(at)cbm.csic.es

Matilde Riquelme Sánchez

Lab.: 111 Ext.: 4698/4705
mriquelme(at)cbm.csic.es